À l'époque étrusque, Chiusi était l'une des principales villes de la dodécapole et, au sixième siècle avant J.-C., le centre a commencé à établir les premiers contacts avec Rome. À la fin du VIe siècle avant J.-C., le lucumone Porsenna assiège et probablement conquiert la ville. La richesse de Chiusi était liée avant tout à la fertilité du sol alluvial et à sa position stratégique, le long d'une artère commerciale très importante : en remontant le Tibre à travers la Chiana, qui à cette époque était navigable, on pouvait en effet atteindre le Valdarno.
Après avoir été occupé par les Goths en 540 après J.-C., Chiusi est devenu le siège d'un duché lombard, documenté jusqu'en 776. À partir du XIe siècle, le pouvoir de la ville reste fermement entre les mains de son évêque, mais à partir du siècle suivant, elle doit se soumettre à l'influence d'Orvieto puis de Sienne. Suite à l'annexion à l'État de Sienne, Chiusi renforce sa municipalité.